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家蚕小热休克蛋白Bmhsp21.4基因的克隆、表达及亚细胞定位

论文发布时间:[2010-01-15]    范文大全    编辑:Voive.net

所有作者:张静 舒特俊 张耀洲

作者单位:浙江理工大学生命科学学院

论文摘要:本实验室克隆一条家蚕蛹期cDNA序列,发现此序列是一个已知的家蚕小热休克蛋白的基因,名为Bmhsp21。4。其包含一个564 bp的开放阅读框,编码一个由187个氨基酸组成的蛋白,预测分子量为21。4 kDa,等电点为5。958。构建重组质粒pET-28a-Bmhsp21。4,并转化感受态细胞BL21(DE3),对其进行原核表达并纯化,以该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备高效价多克隆抗体,间接ELISA法测抗体效价,抗体效价可达1: 6400。Western blot和 RT-PCR分析家蚕五龄幼虫的脂肪,卵巢,精巢,皮,气管,肠,头,马氏管,丝腺和血十个组织及卵,五龄幼虫,蛹和蛾四个时期中BmHSP21。4的分布情况,结果显示BmHSP21。4在家蚕各时期中均有表达,在大部分组织中也都有明显的条带。热激试验中,以温度为梯度,研究五龄幼虫中丝腺、马氏管、头部三个组织中BmHSP21。4蛋白在正常和受激后的表达变化情况,当热激温度达到40℃-45℃时BmHSP21。4表达量最大。以热激时间为梯度,同样对五龄幼虫丝腺、马氏管、头部三个组织进行热激,研究其在不同温度下BmHSP21。4蛋白量的变化情况,发现热激时间为2。5 h-3 h时BmHSP21。4表达量明显高于其他热激时间。最后利用家蚕卵巢细胞BmN研究BmHSP21。4在细胞中的间接免疫荧光实验,BmHSP21。4主要存在于在细胞核中,还有一部分存在胞质。在发生裂解的细胞中,虽然细胞核仍然存在,在细胞核中BmHSP21。4蛋白已不是很明显,仅存在与细胞质中,我们推测BmHSP21。4蛋白有可能和细胞凋亡相关。

关键词: BmHSP21.4 Western blot RT-PCR 热激 间接免疫荧光

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