所有作者：张静 舒特俊 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生命科学学院
论文摘要：本实验室克隆一条家蚕蛹期cDNA序列，发现此序列是一个已知的家蚕小热休克蛋白的基因，名为Bmhsp２１。４。其包含一个５６４ bp的开放阅读框，编码一个由１８７个氨基酸组成的蛋白，预测分子量为２１。４ kDa，等电点为５。９５８。构建重组质粒pET-２８a-Bmhsp２１。４，并转化感受态细胞BL２１(DE３)，对其进行原核表达并纯化，以该重组蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔制备高效价多克隆抗体，间接ELISA法测抗体效价，抗体效价可达１： ６４００。Western blot和 RT-PCR分析家蚕五龄幼虫的脂肪，卵巢，精巢，皮，气管，肠，头，马氏管，丝腺和血十个组织及卵，五龄幼虫，蛹和蛾四个时期中BmHSP２１。４的分布情况，结果显示BmHSP２１。４在家蚕各时期中均有表达，在大部分组织中也都有明显的条带。热激试验中，以温度为梯度，研究五龄幼虫中丝腺、马氏管、头部三个组织中BmHSP２１。４蛋白在正常和受激后的表达变化情况，当热激温度达到４０℃-４５℃时BmHSP２１。４表达量最大。以热激时间为梯度，同样对五龄幼虫丝腺、马氏管、头部三个组织进行热激，研究其在不同温度下BmHSP２１。４蛋白量的变化情况，发现热激时间为２。５ h-３ h时BmHSP２１。４表达量明显高于其他热激时间。最后利用家蚕卵巢细胞BmN研究BmHSP２１。４在细胞中的间接免疫荧光实验，BmHSP２１。４主要存在于在细胞核中，还有一部分存在胞质。在发生裂解的细胞中，虽然细胞核仍然存在，在细胞核中BmHSP２１。４蛋白已不是很明显，仅存在与细胞质中，我们推测BmHSP２１。４蛋白有可能和细胞凋亡相关。
关键词： BmHSP21.4 Western blot RT-PCR 热激 间接免疫荧光
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