家蚕BmNADHb5的表达及其亚细胞定位

论文发布时间：[2010-03-24] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：李婷婷陈健张耀洲

作者单位：浙江理工大学生命科学院生物化学研究所

论文摘要：从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中获得一条ORF为４３８ bp的基因序列（基因登录号：EU８２６６７６），序列比对后推测它是NDUF-b５家族的一个亚基，将其命名为BmNADHb５。将BmNADHb５基因片段与pET-２８a(+)表达载体连接，构建重组质粒，转化E。coli Rosetta并诱导表达，采用亲和层析的方法纯化融合蛋白。将纯化的融合蛋白免疫雄性新西兰兔，制备多克隆抗体，间接ELISA法检测效价在１：１２８００以上。ELISA半定量法和Western blot检测BmNADHb５在不同发育时期和五龄幼虫各组织的表达情况，结果表明在卵期和五龄幼虫的卵巢中表达量最高。同时利用荧光定量PCR技术检测该基因在家蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织的转录水平，结果表明在蛹期和马氏管转录量最高。亚细胞定位发现BmNADHb５主要存在于细胞质中。

关键词： ELISA Western blot 荧光定量PCR 亚细胞定位

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