家蚕BmLp-c21蛋白的表达分析及其亚细胞定位

论文发布时间：[2009-12-15] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：杨丹张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：筛选家蚕蛹cDNA文库，得到一条脂蛋白的cDNA序列，其命名为BmLp-c２１(Bombyx mori lipoprotein pBmHPC-２１)。该基因全长为２８０３ bp，ORF框为７９２ bp，编码２６３个氨基酸残基，预测该蛋白的分子量为３０。２４１ kD，等电点为７。２３。我们将BmLp-c２１基因克隆至原核表达载体pET-２８a(+)，转化大肠杆菌Rosetta(DE３)，IPTG诱导表达融合蛋白，通过亲和层析得到纯化的融合蛋白，用该纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体，ELISA检测效价可达１：６４００。亚细胞定位显示，BmLp-c２１主要存在于细胞质中。通过Western blotting 和实时荧光定量PCR的方法，发现BmLp-c２１在家蚕不同发育阶段和五龄幼虫不同组织中的转录和表达水平存在较大差异。BmLp-c２１在家蚕蛹期及五龄幼虫血液中的转录和表达水平最高。本研究为进一步探讨BmLp-c２１基因在家蚕生长、发育过程中的生物学功能打下了一定的基础。

关键词：家蚕 BmLp-c21 Western blotting RT-PCR 亚细胞定位

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