家蚕钙磷蛋白基因(BmCAPS)的原核表达及定位分析

论文发布时间：[2010-01-04] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：葛红秀刘波解纯刚舒建洪吴祥甫张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：家蚕钙磷蛋白(Bombyx mori calcyphosphine， BmCAPS)是一种钙离子结合蛋白，含有两个EF-hand保守结构域，BmCAPS基因的cDNA序列全长为１０３８ bp(GenBank登录号为DQ４４３２２１)，开放阅读框(ORF)为７２０ bp，编码２３９个氨基酸残基，预测分子量为２６。８７４ kD。我们将BmCAPS的ORF克隆至原核表达载体pET-２８a(+)中，构建重组质粒后转化E。coli BL２１ Star(DE３)，IPTG 诱导表达并纯化带His标签的融合蛋白，免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA法测得抗体效价达１：６４００以上，Western blotting检测抗体的特异性良好。利用免疫荧光技术对BmCAPS进行亚细胞定位，发现该蛋白仅在细胞质中有分布。同时也利用荧光定量PCR和Western blotting技术分别检测该基因在家蚕不同发育时期和五龄幼虫不同组织器官的转录与表达水平，结果表明，在发育时期中靶mRNA的转录水平由卵到蛾依次升高，这与Western blotting的结果相一致；而在各组织中，精巢中的靶mRNA转录水平和目的蛋白表达水平最高，但在头部、表皮和丝腺中则没有检测到目的蛋白的表达。上述研究将为进一步探讨BmCAPS的功能提供一定的依据。

关键词：家蚕 BmCAPS 亚细胞定位荧光定量PCR Western blotting

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