家蚕BmE(spl)-like基因的原核表达定位及功能分析

论文发布时间：[2009-11-25] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：刘颖硕聂作明王丹郑青亮李司全滟平张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：从本实验室所构建的cDNA文库中筛选到一条cDNA，其阅读框为６０６ bp，编码２０１个氨基酸，预测分子量为２２。３kD，等电点为９。７０。在NCBI上进行同源性比对后发现该预测蛋白与果蝇Enhancer of Split (E(spl)) 编码的bHLH（helix-loop-helix）蛋白有较高的同源性，它们都含有一个bHLH保守结构域，一个Orange结构域和羧基末端的（W-R-P-W）结构域。我们将该基因命名为BmE(spl)-like（Bombyx mori Enhancer of Split like）。将BmE(spl)-like基因ORF克隆到融合表达载体pET-２８a相应的酶切位点上，构建重组表达质粒pET-２８a- BmE(spl)-like，转化大肠杆菌BL２１，IPTG诱导表达后，利用亲和层析和FPLC反向柱纯化融合蛋白并对其进行质谱鉴定。用纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。通过Western blotting 和实时荧光定量PCR 的方法，我们发现BmE(spl)-like在不同组织和不同发育阶段的转录和表达水平存在较大差异。同时，我们还对BmE(spl)-like蛋白进行了亚细胞定位，发现该蛋白主要存在于细胞质中。本研究为进一步研究BmE(spl)-like基因在家蚕生长、发育过程中的生物学功能打下基础。

关键词：家蚕BmE(spl)-like基因原核表达 Western blotting 实时荧光定量PCR 亚细胞定位

免费下载《家蚕BmE(spl)-like基因的原核表达定位及功能分析》PDF全文（已停止下载）
　　本站“论文下载”文章收集整理于“中国科技论文在线”，由于各种原因，本站已暂停论文下载！请前往“中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn/”免费下载！

〖返回生物学论文列表〗

下一篇：三烯脂肪酸在高等植物逆境胁迫应答中的作用