家蚕RPA43相关基因（BmRPA43_N）的克隆表达及细胞定位分析

论文发布时间：[2009-11-26] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：刘靓珏盛清张耀洲

作者单位：浙江理工大学生命科学学院

论文摘要：A４３是酵母RNA聚合酶Ⅰ（polⅠ）特有的一个亚基，由RPA４３基因编码，能与rDNA转录所需的转录因子Rrn３相互作用，从而将polⅠ带到rDNA启动子上，起始转录。从本实验室构建的家蚕cDNA文库中筛选到一条开放阅读框（ORF）为６３０bp，编码２０９个氨基酸的基因。生物信息学分析发现此基因编码的蛋白与其他物种中相关蛋白的同源性很低，但却含有一个非常保守的结构域，RNAP_I_Rpa４３_N结构域，故将其命名为BmRPA４３_N（Bombyx mori RPA４３_N）。将克隆的BmRPA４３_N 基因插入到原核表达载体pET-２８a（+）中构建重组质粒，然后在大肠杆菌BL２１(DE３)中表达该融合蛋白，并进行纯化，随后免疫新西兰兔制备多克隆抗体。间接ELISA法检测该多抗的效价在１：１２８００以上。通过Western blotting 和实时荧光定量PCR 的方法，发现BmRPA４３_N 在不同发育阶段转录和表达水平差异较大，在五龄幼虫不同组织中则差异较小，其中卵期和血液中表达量最高，蛾期和脂肪体中最低。同时，我们对BmRPA４３_N 蛋白进行了亚细胞定位分析，发现其主要分布在细胞质中。根据实验结果，推测BmRPA４３_N在家蚕的生殖发育过程中具有比较重要的作用，其具体功能还需要做进一步研究。

关键词：家蚕 BmRPA43_N Western blotting 荧光定量PCR 亚细胞定位

免费下载《家蚕RPA43相关基因（BmRPA43_N）的克隆表达及细胞定位分析》PDF全文（已停止下载）
　　本站“论文下载”文章收集整理于“中国科技论文在线”，由于各种原因，本站已暂停论文下载！请前往“中国科技论文在线http://www.paper.edu.cn/”免费下载！

〖返回生物学论文列表〗

下一篇：家蚕中PGRMC2蛋白的转录、功能分析