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家蚕BmeIF4E基因的克隆、表达及功能分析

论文发布时间:[2009-11-19]    范文大全    编辑:Voive.net

所有作者:韩剑秋 李增鹏 于威 张耀洲

作者单位:浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要:我们通过RT-PCR的方法从家蚕蛹cDNA文库中获得一条cDNA序列,在NCBI的Genbank数据库中进行比对,结果在序列和结构上与其他物种的真核细胞翻译起始因子4E基因具有较高的相似性,推测可能是家蚕eIF4E蛋白基因,我们把这一cDNA序列命名为BmeIF4E(Bombyx mori eukaryotic translation initiation factor 4E)基因,GenBank登录号为DN443192。为初步研究BmeIF4E的功能,将该基因克隆到表达载体pET-28a(+)中,构建原核表达质粒pET-28a(+)-BmeIF4E,转化感受态细胞BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化该重组蛋白,制备多克隆抗体。家蚕Bm5细胞进行亚细胞定位研究结果表明BmeIF4E既存在于细胞质中也存在于细胞核中。荧光定量PCR和Western blot分析结果表明在不同组织及发育时期该基因的表达有差异,在各组织中BmeIF4E表达量从高到底依次是马氏管、表皮、脂肪体、气管、卵巢、中肠、头和丝腺;在卵、幼虫、蛹和蛾四个发育时期中,蛾中的表达量最高,其次是蛹,再次是五龄幼虫,而在卵中几乎没有检测到该蛋白。从以上试验结果可以看出,BmeIF4E作为一种重要的管家基因,在家蚕的整个生命周期中均起着非常重要的作用。

关键词: 家蚕 真核翻译起始因子4E 原核表达 亚细胞定位 实时荧光定量PCR

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