所有作者：左威 郑青亮 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要：真核生物翻译起始因子(eIFs)在蛋白合成中起关键作用，在已经鉴定的１３个因子中elF３(由８个或更多的亚基组成)是分子量最大的一个并在翻译起始过程中起着核心作用。eIF３s５是eIF３的其中一个亚基并介导了eIF３大多数功能的实现。我们通过RT-PCR的方法从家蚕蛹中扩增到家蚕eIF３s５基因的完整的ORF序列，并将其命名为BmeIF３s５（Bombyx mori eIF３s５），GenBank登录号为DQ４４３２８７，该基因序列长为８３４bp，编码２７８个氨基酸，预测分子量为２９。６０kD。我们把BmeIF３sf基因克隆到pET-２８a(+)载体上，并在大肠杆菌中成功表达出重组融合蛋白；纯化融合蛋白并免疫新西兰雄性大白兔获得多克隆抗体血清，ELISA检测抗体效价达到１：５１２００以上。用免疫印迹法实验分析BmeIF３s５蛋白在家蚕不同时期和不同组织中的表达情况，结果表明BmeIF３s５在所检测家蚕的各发育时期和各组织中均有不同程度的表达，其中丝腺、卵、蛾的表达量较高。通过亚细胞定位发现该蛋白主要存在于细胞质中。本研究为进一步探讨BmeIF３s５蛋白在家蚕生长、发育过程中的生物学功能奠定了基础。
关键词： 家蚕 真核翻译起始因子3亚基5 免疫印迹法 亚细胞定位
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