所有作者：李会娟 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要：转胶蛋白(transgelin)是一种肌动蛋白结合蛋白，在成体脊椎动物的平滑肌组织中含量丰富。转胶蛋白的表达是平滑肌细胞(smooth muscle cells， SMC)早期分化的标志。目前，国内外对转胶蛋白的研究多数集中在脊椎动物中，而对无脊椎动物的研究较少。本研究从NCBI数据库中搜索到家蚕转胶蛋白的cDNA序列，命名为BmTGN。该基因ORF长为５６７ bp。编码１８８个氨基酸残基，功能区预测显示含有一个CH(Calponin Homology)结构域。 将BmTGN基因的ORF克隆到表达载体pET-２８a(+)相应的酶切位点上，得到重组质粒pET-２８a(+)-BmTGN。在E。coli Rosetta中表达，SDS-PAGE分析显示在２５ kD左右的位置有一条特异性蛋白条带。纯化获得带有His标签的BmTGN蛋白。质谱分析显示该融合蛋白的分子量为２４。５８９ kD，与理论值２４。４５ kD相符，从而证实了该蛋白表达的正确性。 将纯化的融合蛋白免疫新西兰雄兔获得多克隆抗体，ELISA检测该抗体血清的效价可达１：６４００以上。利用实时荧光定量PCR的方法，对BmTGN在家蚕不同发育时期以及五龄幼虫８个不同组织中的mRNA的量进行比较，并采用Western blotting方法在翻译水平进行分析。结果表明，该蛋白在蚕蛹中表达量最低，而在蛾中含量最高。在五龄幼虫的中肠、表皮、丝腺、脂肪体、精巢、马氏管、卵巢、气管、头部等组织中均有不同程度的表达，但在中肠中的表达量最高。亚细胞定位发现BmTGN定位于细胞质中。
关键词： 家蚕 转胶蛋白 组织定位 亚细胞定位
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