家蚕BmIBP蛋白的表达分析和亚细胞定位

论文发布时间：[2009-11-18] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：马良张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：筛选本实验室家蚕蛹cDNA文库，得到一条编码类胰岛素结合蛋白（insulin-related binding protein）的基因，我们将其命名为BmIBP（Bombyx mori insulin-related binding protein），基因登录号为DQ４４３３７２。１。该基因的ORF为７６８bp，编码２５５个氨基酸残基，是由六个外显子，五个内含子剪接而成。将推测的氨基酸序列进行同源性(BlastP)比对，发现此蛋白序列含有两个保守的IG domains，生物信息学预测其分子量为２７。９８，等电点为７。３６。我们将其ORF克隆到原核表达载体pET-２８a中，然后构建重组质粒，双酶切鉴定及序列测定正确后转化大肠杆菌BL２１(Star)，经IPTG诱导表达的重组蛋白以包涵体形式存在，经过镍柱亲和层析纯化后得到高纯度的His-BmIBP融合蛋白，以该融合蛋白免疫雄性新西兰大白兔获得多克隆抗体，经ELISA检测，效价可达１：１２８００。Western blotting 检测显示BmIBP蛋白在家蚕五龄幼虫卵巢、精巢、脂肪体、马氏管等组织和家蚕卵、蛹、蛾期的发育阶段均有表达。实时荧光定量PCR的结果表明，家蚕BmIBP mRNA在家蚕的各个发育时期及不同组织中广泛存在，在蛹期和五龄幼虫中的卵巢、肠和马氏管中表达量最高。用获得的多克隆抗体进行亚细胞定位，结果显示BmIBP蛋白主要定位在家蚕Bm５细胞的细胞质中。

关键词：家蚕 BmIBP 表达分析实时荧光定量PCR 亚细胞定位

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