Mt-GFP融合基因转化及不同亚细胞定位的GFP在柑橘不同组织部位的表达比较

论文发布时间：[2009-10-23] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：徐世晓谭彬李鼎立郭文武

作者单位：华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室

论文摘要：绿色荧光蛋白基因（gfp）是转基因研究的热门工具之一。柑橘遗传转化中，可以根据GFP的表达，在早期对转化子进行鉴定，同时可在活体细胞中监测外源基因的表达情况。利用融合蛋白技术，将线粒体上特有的蛋白质靶定位序列（细胞色素氧化酶IV）与GFP相连，构建融合基因，将之转入细胞后，该细胞内的线粒体即可带上GFP标记。本研究以柑橘胚性愈伤组织为外植体，用根癌农杆菌介导法进行m-gfp４-coxIV融合基因的转化，共获得来自不同转化事件的细胞系２４个，其中国庆１号温州蜜柑１３个，伏令夏橙１１个。国庆１号转m-gfp４-coxIV基因的愈伤组织荧光表达强且稳定，已用于本课题组细胞融合过程中双亲线粒体互作的动态研究。伏令夏橙转基因愈伤组织经胚胎发生途径诱导生芽、生根或嫁接成为完整植株。同时，通过激光共聚焦显微镜观察比较定位线粒体（Mt-GFP）、内质网（Er-GFP）及细胞质（Cy-GFP）三种不同亚细胞定位的GFP在叶片、茎、根中的表达差异，表明不同亚细胞定位的GFP表达差异显著，其表达部位特点与GFP融合基因构建目的完全吻合，细胞质内表达的Cy-GFP荧光强度明显强于定位线粒体Mt-GFP或内质网Er-GFP的荧光强度。

关键词：绿色荧光蛋白根癌农杆菌介导转化亚细胞定位激光共聚焦显微术

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