所有作者：王丽燕 杨慧林 郑青亮 张耀洲
作者单位：浙江理工大学生物化学研究所
论文摘要：小热激蛋白家族（sHsps）成员分布广泛但保守性很低，系统进化树分析表明它们在早期进化过程中就已开始分化。虽然sHsps在序列和大小上变化很大，但在结构上有以下几种共同特征：１、含有９０个左右氨基酸残基构成的α-晶体蛋白区域；２、半胱氨酸的含量低于其它蛋白家族；３、能够形成大的寡聚体，具有动态的四级结构；４、具有抑制蛋白聚集的分子伴侣活性。本研究选取目前已发现的家蚕小热激蛋白家族中的最小蛋白sHsp１９。９，经过生物信息学分析，分别构建全长及缺失N端１-２４和１-６２氨基酸的三个pET-２８a (+) 表达载体，转化E。coli BL２１-Star表达，包涵体变性后用金属镍柱亲和层析纯化，经过SephedexG-１５０凝胶柱复性后得到纯蛋白。将纯化的重组蛋白sHsp１９。９-FL免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。经还原与非还原SDS-PAGE和Western blot鉴定，三种蛋白均形成了链间二硫键。经过胰蛋白酶（trypsin）敏感实验分析表明三种蛋白均未形成稳定的寡聚体结构。通过柠檬酸合酶（CS）的热聚集实验和溶菌酶（lysozyme）DTT诱导的聚集实验证实全长的小热激蛋白具有分子伴侣的活性，而另外两种蛋白不具有分子伴侣活性。
关键词： 家蚕 小热激蛋白 sHsp19.9 缺失突变 分子伴侣
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