芽孢杆菌同源脱氧核糖醛缩酶的克隆及序列分析

论文发布时间：[2010-04-22] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：陈丽伟杨立荣曹彦凯徐刚吴坚平

作者单位：浙江大学化学工程与生物工程学系

论文摘要：本文采用基因采矿方法从Genebank中选取四株芽孢杆菌，以PCR方法扩增了脱氧核糖醛缩酶（DERA）基因，并在E。coli中实现过量表达。与E。coli K１２ DERA（EcoDERA）相比，各种来源于芽孢杆菌的DERA催化天然底物２-脱氧-D-核糖-５-磷酸（DRP）进行裂解反应的活性接近，但对非磷酸化底物２-脱氧-D-核糖(DR)的催化能力要远大于EcoDERA，且各种酶对两种底物的专一性常数之比（[kcat/Km(DR)]/[ kcat/Km(DRP)]）均比EcoDERA高两到三个数量级，在热稳定性上也有明显优势，在７０℃仍能保持４０-６５％的酶活。经活性位点比较发现四种酶底物结合位点具有相似的结构特征，EcoDERA中Lys１７２，Phe２００，Val２０６和Ser２３９分别在BsuDERA，BliDERA，BamDERA和BthDERA中被Phe，Val，Ile和Arg全部或部分取代，分析表明这种替换可能影响底物结合位点静电环境变化和两个关键活性位点 Lys残基架构周围的疏水相互作用，因此影响底物专一性。

关键词：生物化学工程脱氧核糖醛缩酶基因采矿底物专一性

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