所有作者：肖亚中 刘娟娟 方泽民 房伟 洪宇植 彭惠 张学成
作者单位：安徽大学生命科学学院,生物工程研究中心
论文摘要：从中国南海表层海水微生物宏基因组文库筛选到一β-葡萄糖苷酶阳性克隆pSB１６D１５，经亚克隆测序分析鉴定其含一新型GH３家族β-葡萄糖苷酶基因（bgl３）开发阅读框。bgl３由２５３５个核苷酸组成，G+C含量为４３。０３％，编码蛋白Bgl３由８４４个氨基酸组成，理论分子量为９０， ８０７ Da，与来自Glaciecola sp。 HTCC２９９９以及Alteromonas macleodii ATCC ２７１２６的β-葡萄糖苷酶分别具有９８％和６１％的序列一致性。以pET２２b(+)为载体，成功实现bgl３在E。 coli BL２１(DE３)细胞异源表达，并获得性质稳定的重组蛋白产物。理化性质分析表明，重组蛋白rBgl３氧化pNPG的最适pH为６。５-７。０，最适温度为４５ ℃。rBgl３在pH ７。０到９。０范围内具有比较高的酶活力并具有较好的稳定性：３５ ℃下保存１ h能保持至少９０％的活力。在pH ７。０、４５ ℃的条件下，rBgl３催化pNPG的比酶活为１７。０７ IU&#８２２６；mg-１，Km、Vmax分别为１。８０ mM和０。８１ μmol&#８２２６；min-１&#８２２６；mg-１。当溶液中有１０ mmol/L Cu２+、Fe２+和Fe３+存在时，rBgl３的活性完全被抑制；葡萄糖、乙醇和EDTA对酶活性也有一定抑制作用。
关键词： β-葡萄糖苷酶 GH3家族 宏基因组文库
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