所有作者：柯一凡 康宏 舒维娜 苏雪莲 李振强 闭艳妲 周烨
作者单位：兰州大学口腔医学研究所
论文摘要：背景： 如何运用少量的关节盘组织，在适宜的条件下分离及培养获取数量多、活性高及分化功能良好的种子细胞是目前制约TMJ关节盘组织工程的重要问题之一。 目的： 采用酶消化结合组织块培养法对山羊颞下颌（temporomandibular joint， TMJ）关节盘细胞进行体外培养和扩增，探索TMJ关节盘细胞体外培养及扩增的新方法。 设计、时间及地点： 细胞学体外观察，于２００９-０６/０８在兰州大学细胞与分子生物学实验中心完成。 方法： 在无菌条件下，切取一月龄山羊TMJ关节盘，剪至１。０ mm３ 的碎块，用０。２５％胰酶、０。０１％ I型胶原酶消化关节盘组织块，将消化好的组织块置入６孔板中培养。 主要观察指标： 在倒置显微镜下连续观察细胞的形态变化及贴壁率，甲苯胺蓝染色、I型胶原免疫组化染色进行细胞鉴定，测定其生长曲线。 结果： 原代培养的关节盘纤维软骨细胞４天可观察到贴壁细胞，７天贴壁细胞逐渐增多，第１０天时细胞彼此相连，铺满平底，细胞以梭形为主，部分多角形。传代后１２小时贴壁率达９０％，大部分为多角形，４～５ 天即可长满瓶底。甲苯胺蓝染色可见异染颗粒，胶原免疫组化染色胞浆内可见棕黄色颗粒。 结论： 酶消化结合组织块培养法培养的山羊TMJ关节盘细胞具有较强的增殖能力，可作为TMJ关节盘组织工程中获取大量原代细胞的实用方法。
关键词： 组织块培养法 一月龄山羊 颞下颌关节盘 组织工程
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