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艾滋病病毒VPR基因序列变异对Hela细胞周期和致凋亡作用的影响

论文发布时间:[2010-03-31]    范文大全    编辑:Voive.net

所有作者:郑煜煌 刘纯 何艳 周华英

作者单位:中南大学湘雅二医院艾滋病研究室

论文摘要:目 的 研究带有不同变异位点的艾滋病病毒1型(HIV-1)vpr基因,对感染细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡的机制两者间的可能关系。方法 将14个带有HIV-1 vpr基因片段的pcDNA3。1(+)真核表达载体构建重组质粒,将其转染Hela细胞,并设立保守株vp r基因转染细胞、突变株 vpr-FS基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照,经RT-PCR检测目的基因转染成功后,经Pi染色用流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率。结 果 14个带有不同变异位点的HIV-1 vpr基因片段的Hela细胞,经流式细胞仪检测显示出不同的致细胞周期阻滞和致凋亡的能力。发现转染保守片段HIV-1 vpr的Hela细胞,其细胞周期出现G2期阻滞和细胞凋亡率明显升高,但转染vpr C末端截断的vpr-Fs片段的细胞、空载体pcDNA3。1(+)转染细胞和未转染的hala细胞无此现象。转染了HIV-1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V, 85P, 86G, 94G突变的片段,较vpr保守片段其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力明显下降。初步发现vpr诱导G2期阻滞百分比越高其所致凋亡率越高。结 论 HIV-1vpr基因有明显的致感染细胞G2周期阻滞和致细胞凋亡的作用,但 vpr C末端截断的vpr-Fs片段无此功能。说明中国感染者HIV-1 vpr基因表达蛋白的70V,85P, 86G, 94G位点突变能使其致感染细胞G2期阻滞和凋亡的能力下降。 分析显示vpr诱导G2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关,提示两者的发生机制可能有一定的关联。本研究为进一步探讨HIV-1致病机制和探索可能的基因干预措施打下基础。

关键词: HIV-1 基因 vpr 细胞周期 细胞凋亡

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