小眼虫藻Δ8脂肪酸脱氢酶基因的克隆及在酿酒酵母中的表达

论文发布时间：[2010-02-12] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：黎明欧秀元魏东盛杨向东郭东全钱雪艳邢来君李明春

作者单位：工业微生物教育部重点实验室，天津科技大学生物工程学院，天津 300457

论文摘要：Δ８途径是合成多不饱和脂肪酸的替代途径，Δ８脂肪酸脱氢酶是该途径的关键酶之一。根据已报道的Δ８-脂肪酸脱氢酶基因设计引物，分别从小眼虫藻基因组DNA和cDNA中扩增得到该基因片段，序列分析结果表明，结构基因长１２６６bp，编码４２１氨基酸，而且没有内含子，这是国内外首次报道。该基因比已经报道Δ８-脂肪酸脱氢酶基因长６bp，并且N末端序列不同。将Δ８-脂肪酸脱氢酶基因和酿酒酵母的载体pYES２。０相连构建表达载体pYEFD，转化到营养缺陷型酿酒酵母菌株INVSc１中，并在选择培养基中筛选得到酿酒酵母转化菌株YEFD。YEFD在合适的培养条件下，添加外源底物二十碳二烯酸和二十碳三烯酸并诱导基因表达。通过脂肪酸甲酯气相色谱分析，表明小眼虫藻Δ８-脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母中获得了高效的表达，将二十碳二烯酸和二十碳三烯酸分别转化成二高-γ-亚麻酸和二十碳四烯酸，其底物转化率分别达到了３１。２％和４６。３％。

关键词： Δ8-脂肪酸脱氢酶小眼虫藻多不饱和脂肪酸

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