大鼠蛋白激酶Cγ基因可调控shRNA慢病毒载体的构建及其调控效率的鉴定

论文发布时间：[2010-02-11] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：刘峰肖兴鹏田玉科

作者单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院

论文摘要：目的：构建大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，并在细胞水平鉴定其可调控效率。方法：将前期构建好的含大鼠PKCγ基因的shRNA干扰序列从质粒pLVTHM酶切和含tet-on可调控序列从质粒pLVPT-tTR-KRAB酶切后连接，连接后的新质粒包装成慢病毒后感染C６细胞，筛选出感染慢病毒的C６细胞经不同浓度的强力霉素诱导后，用免疫印迹技术（Western blot）检测PKCγ基因的蛋白表达水平的改变以评价慢病毒载体的可调控效率。结果：测序证实成功构建了大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，感染C６细胞后经强力霉素诱导可以依递增浓度梯度递降PKCγ蛋白的表达。结论：成功构建大鼠PKCγ基因的可调控shRNA干扰慢病毒载体，且慢病毒载体可被强力霉素诱导而特异高效地抑制PKCγ基因的表达。

关键词：蛋白激酶Cγ 慢病毒可调控RNA干扰

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