前列腺特异性的双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx43的构建及鉴定

论文发布时间：[2010-02-04] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：王刚陈岳徐勇张志宏杨阔赵维铭孔德领

作者单位：天津医科大学第二医院，天津市泌尿外科研究所

论文摘要：目的：构建前列腺特异性的双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３，为前列腺癌的基因治疗实验研究奠定基础。方法：获取Cx４３基因并克隆至 pMD１９-T Simple载体；合成HSV-TK基因并克隆到pIRES载体的MCS A中，得pIRES-TK；获取PSMAe/p并克隆至pIRES-TK中替换CMV启动子，得pIRES-PSMAe/p-TK；将Cx４３基因克隆到pIRES-PSMAe/p-TK的MCS B中，得pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３，对此质粒双酶切鉴定并测序；pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３转染人前列腺癌细胞系LNcap，RT-PCR观察TK及Cx４３基因的表达。结果：合成的各质粒经双酶切、琼脂糖凝胶电泳可见目的基因条带；pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３经测序与预期设计相符；pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３转染LNCaP细胞，RT-PCR显示TK及Cx４３的mRNA成功表达。结论：成功构建了含HSV-TK及Cx４３的双基因表达载体pIRES-PSMAe/p-TK-Cx４３。

关键词：前列腺癌表达载体 HSV-TK/GCV 前列腺特异性膜抗原启动子/增强子缝隙连接蛋白43

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