大白菜在接菌条件下cDNA文库的构建及应用初报

论文发布时间：[2010-02-23] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：余传金李小娟谢磊林刘伟来元亮姜伯乐何勇强唐纪良

作者单位：广西大学生命科学与技术学院

论文摘要：本研究以抗病白菜品种中白８３为材料，在接种黑腐病菌条件下提取总RNA，通过SMART （Switching mechanism at ５’ End of the RNA transcript）技术和同源重组的方法，以pGADT７-Rec为载体，在酵母菌AH１０９菌株中构建了中白８３白菜cDNA文库。文库的转化率为２。７１×１０６转化子/１ µ；g pGADT７-Rec载体，重组率为８６。４％。将十字花科黑腐病菌８００４菌株的效应物基因avrXccE１克隆于穿梭载体pGBKT７上，导入酵母菌 Y１８７菌株，构建诱饵系统。对进行毒性实验和自激活等实验后，诱饵系统与构建的cDNA文库杂交。先在SD/-Ade-His-Leu-Trp板上筛选，然后在SD/-Ade-His-Leu-Trp-X-α-Gal板上进行两次复筛，挑取阳性克隆，对双链cDNA进行序列分析，并对NCBI GenBank数据库进行BlastX。初步鉴定出了４个与avrXccE１相互作用的白菜候选基因，分别为泛素共轭连接酶酶１１、硫醇转甲基酶、磷酸活化酶、几丁质酶。目前正在采用免疫共沉淀方法验证avrXccE１与这些候选靶标相互作用的真实性。

关键词：白菜黑腐病 cDNA文库构建应用

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