一株抗欧洲型和美洲型PRRSV核衣壳蛋白的单克隆抗体的制备与鉴定

论文发布时间：[2010-01-11] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：王晓丰李玉峰王先炜王海燕姜平

作者单位：南京农业大学动物医学院

论文摘要：利用RT-PCR方法扩增出欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) SS-６毒株的核衣壳蛋白(N蛋白)基因并将其克隆到原核表达载体pGEX-６p-１上，构建了重组表达质粒pGEX-N，并将其转化到大肠杆菌BL-２１中，在诱导剂IPTG的诱导下获得高效表达，重组蛋白的分子量约为４０KDa。用纯化的重组N蛋白免疫Balb/c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSV N蛋白的单克隆抗体。经细胞融合获得一株可稳定分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，命名为１B６，将其连续培养２０代后仍能稳定分泌抗体。亚型鉴定结果为IgG１型，其轻链为κ链；间接免疫荧光试验和免疫印迹试验均证明，１B６单抗既能与欧洲型PRRSV反应，也能与美洲型PRRSV反应；ELISA检测杂交瘤细胞培养上清抗体效价为１：６４０，腹水的效价为１：２５６０００，为PRRSV诊断奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒核衣壳蛋白单克隆抗体

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