家蚕BmSQD-1蛋白的表达、纯化及其定位分析

论文发布时间：[2009-12-08] 范文大全编辑：Voive.net

所有作者：霍锦霞汲生芝张耀洲

作者单位：浙江理工大学生物化学研究所

论文摘要：从NCBI数据库中检索到家蚕squid基因，被命名为Bmsqd-１，Genebank ID：１１２９８３６９５。该基因的ORF长为８６４ bp，编码２８７个氨基酸残基。根据完整的ORF设计引物，用本实验室蚕蛹cDNA文库为模板，PCR扩增出Bmsqd-１基因序列。生物信息学分析表明，Bmsqd-１基因由４个内含子和５个外显子组成，内含子/外显子切割位点的边界顺序符合Chambon法则。将载体pET-２８a(+)与Bmsqd-１目的基因经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切后，由T４酶连接，重组质粒经过PCR、双酶切、质粒测序均证明，重组的pET-２８a-Bmsqd-１质粒是正确的。将诱导的BL２１(DE３)表达菌超声破碎后，离心，SDS-PAGE电泳检测，BmSQD-１蛋白基本存在于上清中。利用Ni-NTA亲和层析柱纯化了His-BmSQD-１蛋白并对BmSQD-１进行分子量质谱鉴定。将纯化的BmSQD-１蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体。利用Western blotting技术、Real-time PCR对家蚕八个组织，四个时期分别在蛋白水平和mRNA水平对BmSQD-１进行了检测。用免疫荧光方法对BmSQD-１在家蚕BmN细胞中进行亚细胞定位。综上所述，以上结果为后续开展该蛋白的功能研究奠定了基础。

关键词：家蚕 BmSQD-1 表达纯化定位分析

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